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實驗室離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶的具體操作方法

發布時間:2014-1-20 9:58:47??????點擊:

    臺式離心機TD5A-WS可以應用于乳酸脫氫酶及輔酶的提取。乳酸脫氫酶,是一種不需氧脫氫酶,以輔酶I(NAD﹢)為輔酶,催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶,在乳酸含量較高及氧氣充足情況下,催化乳酸生成丙酮酸,體外實驗中,為觀察方便,在隔絕空氣后以甲烯藍作為受氫體,井用固定反應中生成的丙酮酸,而使乳酸全部轉化為丙酮酸。今天我們對如何通過臺式離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶I進行介紹。

  通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設備有:(1)動物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)臺式離心機TD5A-WS等

  具體操作方法:

  1.輔酶I(NAD﹢)的制備:取動物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鐘(抑制酶的活力,防止將輔酶I破壞),取出冷卻、剪碎,加入少許9g/LNaCl溶液及細沙用乳缽研磨成糊狀,再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,利用臺式離心機進行離心沉淀,收集上清液,儲冰箱備用。

  2.乳酸脫氫酶酶蛋白的提取:取動物后腿肌肉2g置乳缽中,加入少許9g/LNaCl溶液及細砂,仔細研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,用雙層紗布過濾,濾液加活性炭0.5g振搖數分鐘后放置半小時,并時常搖動,然后通過臺式離心機離心分離,取上清液備用。

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