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低速離心機制備細胞膜的分離實驗

發布時間:2014-10-27 10:35:58??????點擊:
試劑:生理鹽水,0.25mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2),0.34mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2);器件:常規的分離細胞膜的。
1)取空腹12h雄鼠(150g),斷頭處死,放血。解剖取肝臟,迅速用生理鹽水洗凈,用濾紙吸干。取3g肝臟剪碎,經冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌數次,加18ml預冷0.25mol/L 蔗糖溶液勻漿,用雙層尼龍膜過濾,備用。
2)將勻漿的放入離心管中,沿壁小心加入等體積的0.34mol/L 蔗糖溶液覆蓋于樣品上,以700g離心10min.
3)將離心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌, 1000g(3500r/min)離心10min,重復一次。
4)離心后沉淀為細胞核,其上有一較疏松的上層,小心吸出此上層,懸于密度d20為1.16的蔗糖溶液(51g/L)中,移入離心管,沿壁加密度d20為1.18的蔗糖溶液(51.5g),覆蓋在樣品層上層。700g(3000r/min)離心10min,細胞膜組分位于兩層溶液界面,小心吸出,置低溫保存,以備進一步分析。
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